НАУЧНЫЕ РАБОТЫ/

Диагностика болезней свиней с использованием метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) Гребенникова Т. В. кандидат биологических наук

Метод полимеразной цепной реакции был открыт сравнительно недавно, в 1984 г. американским учёным Кэри Мюллисом. Последние десять лет ПЦР все чаще используется в ветеринарии. ПЦР поднимает лабораторную диагностику на принципиально новый уровень – уровень прямого обнаружения сверхмалых количеств вирусов и бактерий в пробах, полученных от животных.

Преимущества метода ПЦР:

Чувствительность данного метода достигает 10-15 г (что составляет несколько копий инфекционного агента на пробу объемом 0,2 мл.)

Специфичность Тест-система разрабатывается таким образом, чтобы определять строго определённый инфекционный агент (или группу инфекционных агентов), вызывающих данное заболевание.

Возможность дифференциальной видовой диагностики Видовая диагностика требуется, когда известно несколько видов возбудителя, при этом различные виды варьируют по своей патогенности. Методом ПЦР можно дифференцировать М. bovis и M. tuberculosis от непатогенных видов микобактерий в течение 1-2 дней. С использованием ПЦР можно достоверно отличить патогенный штамм сибирской язвы (B. anthracis) от т. н. «атипичных» видов и определить, когда заболевание представляет реальную угрозу.

Быстрота Время обнаружения некоторых возбудителей методом ПЦР по сравнению с микробиологическим исследованием может сокращаться в 10-20 раз.

Возможность определять маскированный возбудитель Возбудитель может находиться в маскированном состоянии, например, из-за агрегации с клеточными структурами или связывания с антителами. В случае диагностики классической чумы свиней, метод ПЦР оказывается незаменимым.

Возможность диагностики возбудителя в различных образцах Метод ПЦР можно использовать для определения патогена даже в таких образцах, как сперма животных. Например, вирус репродуктивного и респираторного синдрома свиней в сперме животных можно определить только методом ПЦР, что является важным при исследовании племенных животных.

С помощью тест-систем на основе ПЦР можно проводить как единичные диагностические исследования, так и осуществлять широкомасштабный мониторинг поголовья в различных свиноводческих хозяйствах, что позволяет своевременно устанавливать или подтверждать диагноз у инфицированных животных.

Тест-системы для диагностики инфекционных
болезней свиней методом ПЦР, выпускаемые НПО «НАРВАК»

• Тест-система для обнаружения вируса классической чумы свиней (КЧС)
• Тест-система для обнаружения вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС)
• Тест-система для обнаружения патогенных лептоспир
• Тест-система для обнаружения вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС) и дифференциации его от респираторного коронавируса свиней (РКВС)
• Тест-система для индикации и дифференциации M. bovis и M. tuberculosis
• Тест-система для обнаружения цирковируса свиней второго типа

Готовятся к выпуску:

• Тест-система для обнаружения парвовируса свиней
• Тест-система для обнаружения вируса гриппа А
• Тест-система для обнаружения и дифференциации подтипов Н5 и Н7 вируса гриппа А.

ПЦР в реальном времени – самый современный метод молекулярной диагностики.

Одной из самых современных модификаций ПЦР является ПЦР в реальном времени.
ПЦР в реальном времени проводят в особых приборах. Прибор представляет собой амплификатор, совмещенный с флюориметром. В процессе ПЦР происходит накопление флюоресцентной метки и считывание флюоресценции в каждый момент времени, в процессе реакции. Пример считывания результатов амплификации в реальном времени представлен на рисунке.
Применение ПЦР в реальном времени дает возможность проводить количественные исследования микроорганизмов. Кроме того, используя различные красители можно проводить определение нескольких инфекционных агентов в одной пробе.

1. Существенное повышение специфичности метода за счет наличия внутреннего специфического зонда;
2. Возможность количественного определения инфекционного агента;
3. Надежность из-за снижения риска контаминации (информацию о составе пробы и о ходе реакции можно получить, не открывая пробирку)
4. Возможность создания систем множественной ПЦР, позволяющих определять несколько возбудителей в одном образце;
5. Снижение времени проведения реакции;

Услуги, предлагаемые специалистами НПО «НАРВАК»