В.А. Сергеев, профессор, доктор биологических наук,
Москва, Россия
По экономическому ущербу, причиняемому промышленному свиноводству, вирусные гастроэнтериты уступают только классической чуме свиней (КЧС). К вирусным гастроэнтеритам свиней относят трансмиссивный гастроэнтерит свиней (ТГС), эпизоотическую диарею свиней (ЭДС) и ротавирусный энтерит свиней (РЭС). Первые два заболевания (ТГС и ЭДС) являются наиболее массовыми и опасными. Они характеризуются высокой заболеваемостью и смертностью новорожденных поросят. Их возбудителями являются типичные коронавирусы свиней, однако, не имеющие между собой антигенного родства и не создающие перекрестного иммунитета. ТГС в различных странах встречается чаще, чем ЭДС.
Ротавирусный энтерит вызывается ротавирусом, постоянно циркулирующим среди свиней в нормальных условиях, и сам по себе не характеризуется высокой заболеваемостью и летальностью у поросят.
ТРАНСМИССИВНЫЙ ГАСТРОЭНТЕРИТ СВИНЕЙ (ТГС) – высококонтагиозное вирусное заболевание свиней, которое характеризуется рвотой, изнуряющей диареей и дегидратацией. Заболеванию подтверждены свиньи всех возрастов. Однако наиболее восприимчивыми являются новорожденные поросята до 2-недельного возраста, уровень летальности среди которых может достигать 100% при инфицировании в первые дни после рождения. Гибель поросят старше 5-недельного возраста обычно невысокая. (Bohl E.H.., Frederick G.Т., Saif L.J., 1975; Собко А.И., Краснобаев Е.А., 1987).
Болезнь широко распространена во многих странах с развитым свиноводством и причиняет большой экономический ущерб. Особую опасность ТГС представляет для крупных свиноводческих комплексов с непрерывными опоросами, где, благодаря длительной персистенции вирулентных штаммов вируса, заболевание зачастую приобретает энзоотическое течение и периодически вызывает массовую гибель новорожденных поросят (Котов В.Г., Шахов А.Г., 1978; Bohl E.H., 1981; Saif L.J., Wesley R.D., 1999). Естественное латентное реинфицирование свиноматок обеспечивает пассивный (колостральный) иммунитет у новорожденных поросят. По мере снижения иммунитета возникает возможность возобновления заболевания, особенно это касается поросят от ремонтных свинок.
ТГС впервые был описан в 1945 г. (Doyle L.P., Hutchings L.M., 1946), хотя это заболевание встречалось и ранее. В нашей стране ТГС впервые зарегистрирован в свиноводческих хозяйствах Ленинградской области в 1956 г. (Погоняйло Г.Ф. и др., 1956). В 1970-1980 гг. в странах Европы и Северной Америки серопозитивные к вирусу ТГС животные обнаружены в 19–54% обследованных хозяйств (Gagnon A.N.,et al., 1974; Toma B., et al., 1978; Egnan I.T., et al., 1982).
При возникновении заболевания в ранее благополучных хозяйствах поросята заболевают в первые дни после рождения и быстро погибают. Погибают почти все поросята до 10-дневного возраста (эпизоотическая форма). В стационарно неблагополучных хозяйствах гибель поросят к отъему составляет 10–20% (энзоотическая форма). Частота вспышек ТГС и экономический ущерб от заболевания находятся в прямой зависимости от численности свиней в хозяйстве (Притулин П.И., 1976; Котов В.Т., Шахов А.Г. 1978; Toma B., et al., 1978; Pritchard G.C., 1978; Собко А.И., Краснобаев Е.А., 1987; Mousing J., et al., 1988; Bohl E.H., 1989).
Лабораторная диагностика ТГС основывается на выявлении вирусного антигена, специфических антител, обнаружении вирусного генома и выделении вируса. Антиген вируса ТГС в мазках-отпечатках или криосрезах тонкого отдела кишечника больных поросят выявляют методом флюоресцирующих антител (МФА) (Pensaert M.B., et al., 1970; Black J.W., 1971; Chu R.M., et al., 1982). Дифференциация антигенов вируса ТГС и его природно аттенуированного мутанта – респираторного коронавируса свиней (РКВС) возможна лишь с использованием моноклональных антител. На этой основе разработан МФА для выявления специфических антигенов в фиксированных парафинированных срезах кишечника и легких поросят.
Для обнаружения антигена вирусов ТГС и РКВС в фекалиях, кишечнике, легких и клеточных культурах используют твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА). Чувствительность метода составляет 4,0–5,0 lg вирусных частиц в пробе (Cornaglia E., et al., 1994). В настоящее время для диагностики ТГС наиболее широко используют метод ПЦР, способный выявить ≤ 10 инфекционных вирусных частиц в пробе и устанавливать природу вируса.
Антитела к вирусу ТГС обычно выявляют в РН и ИФА.
Специфическая профилактика ТГС оказалась исключительно трудной задачей, которая, несмотря на многочисленные исследования, до недавнего времени оставалась не решенной проблемой (Bachmann P.A., Hess R.G., 1978; Pensaert M.B., 1979; Aynaud J.M., et al., 1984; 1986; Собко А.И., Краснобаев Е.А.б 1987; Saif L.J., Wesley, R.D., 1999).
Основную роль в защите свиней от ТГС играет местный иммунитет (иммунная система слизистых оболочек), медиатором которого является секреторный иммуноглобулин класса А (sIgA), который нейтрализует вирус на поверхности слизистой оболочки и предупреждает развитие инфекции.
Клеточный иммунитет также играет роль в защите свиней от ТГС и РКВС. Антителозависимая клеточная цитотоксичность осуществляется с помощью нормальных киллеров и макрофагов. Поскольку заражение поросят вирусом ТГС происходит в первые часы (сутки) после рождения, то основу стратегии специфической профилактики ТГС составляет активная иммунизация супоросных свиноматок с целью обеспечения пассивной защиты потомства. Для этого необходимо наличие высокого уровня секреторного IgA в молозиве и молоке свиноматок, что достигается с большим трудом. Оказалось, что лактогенный иммунитет наиболее эффективно стимулируется, если вирус размножается в кишечнике свиноматок и его антигенность реализуется благодаря тесной иммунологической связи в системе кишечник-молочная железа. К сожалению, не удалось получить безопасный вакцинный штамм, обладающий выраженной способностью размножаться в кишечнике свиноматок и вызывать выраженный синтез IgA в молочной железе.
Скармливание аттенуированных штаммов вируса ТГС супоросным свиноматкам в течение длительного периода (10 суток) также, как введение другими путями, оказалось недостаточно эффективным.
Живые безопасные вакцины не обеспечивают удовлетворительной защиты, хотя все они в различной степени уменьшают смертность от ТГС новорожденных поросят и при систематической вакцинации в хозяйствах с энзоотическим течением ТГС могут привести к ликвидации болезни (Pensaert M., Van Reeth K., 1997).
Эффективная иммунизация была достигнута только при двукратном внутримышечном и интраназальном введении супоросным свиноматкам вакцинного штамма (ТО-163) в большой дозе 108,0-109,3 ТЦД50. (Kaji T., Shimizu Y., 1978).
С появлением и широким распространением в 80-х годах прошлого века природноаттенуированного респираторного варианта вируса ТГС (Pensaert M., at al., 1986, 1993) это заболевание в Западной Европе перестало быть проблемой (Pensaert M., Reeth K., 1997). Респираторный коронавирус передавался аэрогенно и легко вызывал персистенцию у свиней и, как правило, популяционный иммунитет. Однако в США при циркуляции в популяции свиней аналогичного вируса проблема специфической профилактики ТГС практически не потеряла своей актуальности (Saif L.J., Wesley, R.D., 1999). Подобная ситуация сохраняется в России и Азии. Новый вариант вируса ТГС, получивший название респираторный коронавирус свиней (РКВС), стали использовать в ряде стран для иммунизации свиней против ТГС (Callebaut P., et al., 1990; Cox E.,et al., 1993; Lanza I., et al., 1995). РКВС оказался природным аттенуированным мутантом вируса ТГС (Laude H., et al., 1993), утратившим вирулентность и приобретшим пневмотропность. Штамм РКВС использован нами при разработке специфической профилактики гастроэнтерита свиней (ТГС), основанной на использовании комбинированной вакцины и комбинированной вакцинации. Комбинированная вакцина (ТР-1) НПО НАРВАК представляет собой лиофилизированный препарат для интраназального применения и эмульгированный инактивированный препарат для внутримышечного введения. Первый готовят из вируса РКВС, второй – из вируса ТГС и ротавируса свиней. Комбинированная вакцинация заключается в двукратной иммунизации свиноматок на 70–75-й день супоросности одновременно внутримышечно и интерназально и на 90–95-й день супоросности только внутримышечно. Вакцинальный лактогенный иммунитет обеспечивает выраженную защиту новорожденных поросят в экспериментальных и полевых условиях (защита соответственно 70–80% и 90–95% поросят). Комбинированная вакцина ТР-1 успешно применяется в борьбе с ТГС в РФ в течение последних 15 лет.
Однако, изготовление вакцины ТР-1 связано с использованием трех вирусов, а применение – с интраназальным введением РКВС супоросным свиноматкам. В этой связи в НПО НАРВАК в 2005 г. была разработана инактивированная вакцина из высоковирулентного вируса ТГС, получившая название «вакцина ТГИ». Эта вакцина прошла тщательную проверку в пяти крупных свиноводческих хозяйствах.
Результаты проведенных исследований показали безопасность и высокую эффективность инактивированной культуральной вакцины ТГИ.
Судя по защитному эффекту новорожденных поросят и титру вируснейтрализующих антител (ВНА) в молозиве у привитых свиноматок в день опороса, вакцина ТГИ по иммуногенности превосходила все известные вакцины против ТГС, включая вакцину ТР-1, а также иммунизацию супоросных свиноматок «кишечным» вирусом. Эмульгированная вакцина в ряде опытов оказалась более иммуногенной, чем сорбированная, хотя применялась в меньшей дозировке.
Способ иммунизации |
Количество свиноматок |
Количество свиноматок с указанным титром антител |
|||||
|
1:80 |
1:160 |
1:320 |
1:640 |
1:1280 |
1:2560 |
||
|
Инакт. вакцина |
40 |
- |
2 |
3 |
8 |
14 |
13 |
|
Вирул.вирус |
40 |
- |
2 |
4 |
7 |
11 |
16 |
Весьма ценным оказалось определение уровня вакцинального иммунитета по титру ВНА в молозиве. Ранее (9) была установлена линейная зависимость между защитой поросят и титром колостральных ВНА. Титр молозивных антител у свиноматок в день опороса равный 1:1024 обеспечивал защиту всех 3–5 дневных поросят от орального заражения вирулентным (кишечным) вирусом ТГС (6,0–7,0 ИД50 для поросят). Однако, такой корреляции не наблюдали, если определяли ВНА в сыворотке крови или молоке свиноматок. Кроме того, было показано, что выраженный вакцинальный иммунитет сопровождается более высоким уровнем колостральных ВНА, чем оральная иммунизация супоросных свиноматок вирулентным кишечным вирусом ТГС и аналогичен уровню антител в молозиве реконвалесцентов (9).
Полученные нами данные согласуются с результатом этих наблюдений. У большинства свиноматок, привитых вакциной ТГИ, титр ВНА в молозиве был равен 1:1280 – 1:2560.
После одного тура иммунизации свиноматок вакциной ТГИ в четырех крупных хозяйствах, неблагополучных по ТГС общий отход поросят к периоду отъема в среднем составил 8,5 %. Определение уровня специфических вируснейтрализующих антител в молозиве вакцинированных свиноматок в день опороса является надежным лабораторным методом оценки иммунитета при ТГС.
Учитывая большой экономический ущерб и недостаточную эффективность вакцинопрофилактики при ТГС, в различных странах с высокоразвитым свиноводством иногда прибегают к искусственному инфицированию супоросных свиноматок с целью создания у них выраженного иммунитета к моменту опороса и пассивной защиты потомства. Такая чрезвычайная мера защиты поросят за счет материнских колостральных антител, как правило, дает положительный результат. В молозиве таких свиноматок титр ВНА достигает защитного уровня ≥ 1:1280.
Однако, негативное явление такой иммунизации состоит в том, что искусственно зараженные свиноматки и естественно инфицированное остальное поголовье хозяйства остаются длительными носителями вируса и представляют серьезную угрозу повторного возникновения и распространения болезни.
Установлено, что переболевшие свиноматки могут выделять вирус ТГС без снижения вирулентности для новорожденных поросят не менее 18 месяцев.
После того, как устранена острая вспышка болезни, сопровождающаяся массовой гибелью поросят, необходимо прекратить искусственное заражение свиноматок и перейти на иммунизацию инактивированной вакциной. Такие вакцины разработаны и производится НПО НАРВАК, эффективность которых подтверждена на примере многих крупных свиноводческих хозяйств без применения искусственного заражения свиноматок.
Ликвидацию ТГС в результате замены искусственного заражения супоросных свиноматок на последующую иммунизацию вакциной ТГИ проводили в хозяйстве промышленного типа (70–80 тыс. свиней), в котором в течение многих лет специфическую профилактику ТГС проводили внутримышечным и оральным заражением супоросных свиней не менее двух раз перед каждым опоросом.
Проведенные исследования показали широкое носительство вируса ТГС различными категориями свиней, особенно в период иммунизации вирулентным вирусом. По мере иммунизации свиней инактивированной вакциной в последующий период выделение вируса ТГС с фекалиями значительно снижалось. Наиболее часто вирус обнаруживали у безмолозивных поросят вскоре после рождения. При исследовании молозива методом ПЦР в двух пробах из 15 обнаружен вирус ТГС, несмотря на наличие ВНА в титре 1:64–1:1280. Исследование 30 проб спермы хряков методом ПЦР не выявило наличие вируса. Особый интерес представляют исследования по выращиванию безмолозивных поросят в изолированных условиях при искусственном кормлении. Только примерно через 1,5 года после замены заражения свиноматок вирулентным вирусом на применение инактивированной вакцины, стали рождаться поросята, не зараженные вирусом ТГС. Другие методы исследования также указывали на наличие носительства вируса ТГС у свиней.
Заключение. Главная опасность распространения ТГС связана с завозом в хозяйство латентно инфицированных животных. Поэтому перед приобретением нового поголовья его обязательно следует проверить на серонегативность к вирусу ТГС методом ИФА, РН.
Основу борьбы с ТГС, особенно в крупных хозяйствах, должна составлять вакцинация. Иммунизацию супоросных свиноматок вирулентным вирусом ТГС необходимо рассматривать как экстраординарную кратковременную меру, применяемую при внезапной острой вспышке болезни в период отсутствия вакцины. Искусственная иммунизация свиноматок натуральным вирусом приводит к латентному инфицированию поголовья, которое длительно сохраняется, несмотря на последующую вакцинацию и сопровождается рождением инфицированных поросят. Выращивание безмолозивных поросят является методом обнаружения их внутриутробного инфицирования. С учетом длительного носительства вируса вакцинация против ТГС должна продолжаться не менее 1,5 лет и контролироваться клиническими наблюдениями и лабораторными исследованиями (ИФА, ПЦР). При появлении диарейного синдрома у свиней, в хозяйстве необходимо исключить клинически сходную с ТГС эпизоотическую диарею свиней, специфическая профилактика которой практически разработана.
ЭПИЗООТИЧЕСКАЯ ДИАРЕЯ СВИНЕЙ (ЭДС). В 1971 г. в Англии произошла вспышка острой диареи неизвестной этиологии у откормочных свиней и подсосных поросят. Клинически болезнь напоминала трансмиссивный гастроэнтерит (ТГС) с той лишь разницей, что у поросят-сосунов (до 4–5-недельного возраста) отсутствовала рвота (J. Oldham, 1972). Аналогичное заболевание, наблюдавшееся в других европейских странах, получило название «эпизоотическая вирусная диарея» (EVD). В 1976 г. вспышку острой диареи отмечали у свиней всех возрастов, включая поросят-сосунов (Е.Н. Wood, 1977), в дальнейшем установили, что причиной ее был коронавирус (D. Chasey et al, 1978; M.B. Pensaert, 1978). Изолят, обозначенный CV777, вызывал диарею при экспериментальном заражении поросят (P. De Bouck et al., 1980) и свиней на откорме. Этот вирус получил название «porcine epidemic diarrea» (PED) (M.B. Pensаert, 1982). Он представлен плеоморфными, преимущественно сферическими частицами диаметром 95–190 нм, наличие серотипов не установлено. Изолированные в Европе, Корее и Китае штаммы идентичны прототипному штамму CV777 (R. G. Hess et al., 1980; K. H. Witte et al., 1981; P. Vannier and P. De Bouck, 1983). Вирус ЭДС антигенно отличается от 2 известных коронавирусов свиней: ТГС и гемагглютинирующего вируса энцефаломиелита свиней, а также от коронавирусов собак, кошек, телят и кур (M. B. Pensaert et al., 1981; H.H.Witte et al., 1981). На основе анализа мембранного гликопротеина вирус ЭДС отнесли к антигенной группе 1 коронавирусов (A. Utiger et al., 1995). По структуре генома он занимает промежуточное положение между коронавирусом человека 229E и вирусом ТГС (A. Bridgen et al., 1993). В содержимом тонкого отдела кишечника поросят в начальной стадии диареи концентрация его достигает 105-мл инфицирующих доз (P. De Bouck et al., 1980). Для серийного размножения вируса ЭДС пригодны некоторые линии (сублинии) клеток Vero, накопление его достигало 105,5 БОЕ/мл (М. Hofmann et al., 1988, 1989). Вирус, адаптированный к клеткам Vero, мог размножаться в других культурах клеток.
Вирусный антиген легко выявляли методом ИФА в фекалиях поросят в течение 11 дней после заражения (A. Carvajal et al., 1995). Специфические антитела легко обнаруживали различными методами у инфицированных свиней в Бельгии, Англии, Германии, Франции, Голландии, Швейцарии, Болгарии и Тайване и не найдены в Северной Америке и Австрии (P. De Bouck et al., 1982; M. Hofmann et al., 1987; K. Mostl et al., 1990). Вирус ЭДС обнаружен в большинстве стран Европы, Китае (C. Qinghua et al., 1992), Корее (С.Н. Kweon et al., 1993) и Японии (K. Takahashi et al., 1983; H. Kuwachara et al., 1988), а в Северной и Южной Америке пока не обнаружен. В 1993-1994 гг. в Японии смертность поросят-сосунов составляла 30–80%. В течение этих эпизоотий у взрослых свиней наблюдали только легкое угнетение и снижение секреции молока (M. Sueyoshi et al., 1995). В Корее ЭДС вызывала диарею у свиней всех возрастов. Болезнь регистрировали круглый год, но чаще в холодное время года. В 90% случаев заболевание поражало поросят моложе 10 дней (E.K. Hwang et al., 1994). Эпизоотические вспышки ЭДС в Европе отмечали редко. Их наблюдали главным образом у свиней на доращивании и откорме. Выраженная сероконверсия наступала через 4 недели. Заболевание сопровождалось лактогенным иммунитетом. В Испании ЭДС у животных протекала в виде эпизоотии и сопровождалась диареей (A. Carvajal et al., 1995а). Специфические антитела найдены у 1513 из 5098 свиноматок и в 55,9% случаев из 798 ферм (A. Carvajal et al., 1995c). В Голландии острая вспышка ЭДС сопровождалась диареей поросят на доращивании и откорме (A. Pijpers et al., 1993). Первые признаки болезни наблюдали у поросят в период доращивания, инфекция быстро распространялась на свиноматок, новорожденный молодняк и подрастающих свинок. Вирус персистирует у 6–10-недельных поросят и молодых свинок и может вызвать болезнь у вновь введенных в ранее неблагополучные хозяйства свиней, по крайней мере, в течение 1,5 лет.
Ситуация в Азии, где диарея сопровождалась высокой смертностью, отличается от таковой в Европе. Вероятно, это связано с популяционным иммунитетом в Европе. Широкая (45%) серопозитивность в Корее подтверждает эндемичность ЭДС в некоторых зонах страны (C.H. Kweon et al., 1994).
Фекально-оральный путь передачи возбудителя ЭДС, вероятно, главный, если не единственный. Острая вспышка ЭДС на восприимчивом поголовье возникает через 45 дней после приобретения инфицированных свиней. Вирус вносится инфицированными свиньями или контаминированными предметами, распространяется в основном теми же путями, что и ТГС, но персистирует длительнее.
Главным и часто единственным видимым клиническим признаком ЭДС является водянистая диарея. Острые вспышки на откормочных фермах, включая молодых поросят, наблюдают редко в регионах или странах, где вирус широко распространен, а популяция свиноматок в большей части иммунна. Вспышки в репродуктивных хозяйствах широко варьируют по заболеваемости и летальности. В некоторых хозяйствах болеют свиньи всех возрастов, а заболеваемость достигает 100%. ЭДС напоминает ТГС, за исключением более медленного распространения и иногда низкой смертности новорожденных поросят. Последние в возрасте до 7 дней погибают от диареи в течение 3–4 дней. Смертность в среднем составляет 50%, но может достигать 80%. Взрослые свиньи выздоравливают примерно через 1 неделю. Острые вспышки с высокой смертностью новорожденных поросят были описаны недавно в Японии и Корее. Высокая вариабельность течения ЭДС на репродукторных фермах не имеет объяснения. Не найдено разницы в вирулентности полевых изолятов вируса ЭДС. У свиней в период откорма болезнь протекала более сурово, чем ТГС. Выздоровление наступало через 7–10 дней. Смертность 1–3%, обычно в ранней стадии диареи. Создавалось впечатление, что молодняк в период откорма более чувствителен к вирусу, и заболеваемость среди него при острой вспышке может достигать 100%.
По сравнению с ТГС ЭДС распространяется медленнее, например из одного свинарника в другой внутри одного хозяйства в течение 4–6 недель, а в некоторых случаях отдельные свинарники вообще могут оставаться свободными от ЭДС. 3-дневные безмолозивные поросята, зараженные орально CV777, заболевали через 22–36 ч. Вирус размножается в цитоплазме эпителиальных клеток ворсинок тонкой и ободочной кишки. Ворсинки тонкого отдела укорачиваются, и соотношение между их высотой и глубиной крипт составляет 3:1 вместо 7:1. Вирусный антиген обнаруживают в клетках до 5 дней после заражения. Патогенез при ЭДС подобен таковому при ТГС. Однако в последнем случае изменения развиваются быстрее в течение 18–24 ч. после заражения и сопровождаются более тяжелыми поражениями.
Патогенез ЭДС у взрослых свиней детально не изучен, но эпителиальные клетки, содержащие вирусный антиген, регистрировали в тонкой и подвздошной кишке после экспериментального и естественного заражения. Нет патогенетического объяснения внезапной гибели, сопровождающей острый некроз мышц, часто наблюдаемый у растущих и взрослых свиней. В ректальных смывах методом ИФА антиген вируса ЭДС выявляют в течение 11 дней после экспериментального заражения (A. Carvajal et al., 1995). Патогенетическая картина, описанная в Корее и Японии, идентична таковой в Европе (E. K. Hwang et al., 1994; M. Sueyoshi et al., 1995).
Патологоанатомические изменения при ЭДС подобны наблюдаемым при ТГС (A. Pospischie et al. 1981; R. Ducattele et al., 1982a; E.K. Hwang et al., 1994; M. Sueyoshi et al., 1995).
Клинически ЭДС нельзя отличить от ТГС. При острых вспышках ЭДС диарею отмечают у свиней всех возрастов, включая молодых поросят. В Европе вспышки ТГС характеризуются быстро распространяющейся диареей новорожденных поросят и взрослых животных в репродукторных фермах. В лабораторной диагностике ЭДС используют те же методы, что и для ТГС: ПЦР, ИФА, МФА, РН, стрипы.
Антитела выявляли на 7-й, но лучше на 10–13-й день после заражения (A. Carvajal et al., 1995b), они сохраняются 1 год. Повторное заболевание серопозитивных свиней с развитием диареи может произойти через 5 мес., оно сопровождается быстрой бустерной реакцией (P. De Bouck et al., 1984; К.Н. Witte et al., 1987).
Радикальные средства борьбы с ЭДС до последнего времени не были разработаны. Поэтому эффективной мерой борьбы являлось искусственное инфицирование супоросных свиноматок вирулентным вирусом ЭДС, которое сопровождалось быстрым развитием лактогенного иммунитета и прекращением болезни в хозяйстве. Эта мера борьбы подобна той, которая применяется при ТГС. В небольших хозяйствах после вспышки на сосунах заболевание на доращивании можно остановить удалением поросят в другие помещения, по крайней мере, на 4 недели. Вирус проникает в хозяйство главным образом, (если не единственно) через животных и человека (Bollwahn, 1983).
Вспышка ЭДС в Европе в 1997 г. не причинила большого ущерба и не послужила причиной создания вакцины. Вспышки в Азии были тяжелыми и явились причиной исследований по аттенуации вируса. В результате адаптации к культуре клеток штамм CV777 отличался по последовательности нуклеотидов и вирулентности. Только 5 из 21 новорожденных безмолозивных поросят проявили слабую диарею и слабые гистопатологические изменения. Корейский штамм после 93 пассажей в клетках Vero оказался аттенуированным для новорожденных поросят и супоросных свиноматок и явился кандидатом для живой вакцины.
В 2007–2010 гг. в НПО НАРВАК были проведены исследования по созданию и испытанию в экспериментальных и производственных условиях живой вакцины против ЭДС. Вирулентный штамм ИС вируса ЭДС был аттенуирован путем серийного пассирования в культуре клеток Vero. После 30 серийных пассажей штамм ИС утратил вирулентность для новорожденных поросят при пероральном заражении. После 80 пассажей в культуре клеток Vero штамм ИС накапливался в титре 105,5–106,3 ТДС50 мл.
Аттенуированный штамм ИС вируса ЭДС сохранял антигенность и иммуногенность для свиней при парентеральном введении в течение 100 пассажей в культуре клеток Vero.
Из аттенуированного штамма ИС вируса ЭДС изготовлена сухая и жидкая живая вакцина ИС-ЭДС.
Инфекционная активность вакцинного вируса в сухой вакцине в процессе изготовления и хранения при 2–8°С в течение 12 мес. снижалась в среднем на 1,3 lg ТДЦ50 мл. В жидкой вакцине в процессе изготовления и хранения при -18 – -20°С инфекционная активность вируса снижалась в течение 2 мес. в среднем на 0,5 lg ТДЦ50 мл.
Живая вакцина ИС-ЭДС после 2-кратного введения свиньям на 75–80 и 90–95 день супоросности в дозе 104ТЦД50 создавала выраженный иммунитет у новорожденных поросят и прекращала ЭДС в неблагополучных хозяйствах. Титр вируснейтрализующих антител в сыворотке крови и молозиве вакцинированных свиноматок в день опороса был в пределах соответственно 1:80 – 1:320 и 1:120 – 1:320. В сыворотке крови поросят титр материнских BNA на 2, 4, 7, и 15 день составлял соответственно 1:190, 1:110, 1:90 и 1:60.
РОТАВИРУСНАЯ ДИАРЕЯ СВИНЕЙ (РВДС). Ротавирусы вызывают энтериты у многих видов животных. Энтеропатогенность ротавируса свиней (РВС) доказана его способностью вызывать острый гастроэнтерит с атрофией ворсинок кишечника при экспериментальном заражении безмолозивных поросят. РВС часто обнаруживают у поросят с диареей. Постоянное присутствие возбудителя в популяции свиней (J. G. Lecce et al., 1978, 1982, M. McNulty et al., 1978, 1982; E. H. Bohl et al., 1978, 1982) лежит в основе субклинического инфицирования этих животных, которое происходит часто или считается обычным явлением для РВДС. Данная особенность РВБС свидетельствует о том, что развитие клинических признаков зависит от организма, возбудителя и окружающей среды (P. S. Paul et al., 1999).
Ротавирусы впервые обнаружены у больных диареей телят (С.А. Mebus et al., 1969), а затем у человека и разных видов животных. Известно 7 серогрупп ротавирусов: A, B, C, D, E, F и C (S. Pedley et al., 1986; J. C. Bridgen, 1987). Ротавирусы серогруппы А наиболее распространенные и изученные. Все ротавирусы имеют групповой антиген (G.N. Woode et al., 1976; M.Estes et al., 1983), который связан с белком VP6 внутреннего капсида вириона (M.Estes et al., 1989). Ротавирусы групп В и С зарегистрированы у свиней, крупного рогатого скота и человека, а групп D, F и G – только у цыплят и индеек (E.H. Bohl et al., 1982; J.C. Bridger et al., 1986, 1987; H. Tsunemitsu et. al., 1991). Внутри серогрупп различают серотипы, которые связаны с капсидными белками VP4 и VP7, ответственными за иммунитет (Paul Lyoo, 1993) и образование нейтрализующих антител (J. Geenberg et al., 1983). Классическая РН с использованием гипериммунной сыворотки различает серотипы на основе VP7 (M.Estes et al., 1989). РВС удалось размножить в первичной культуре клеток почки поросят, а многие его штаммы – в роллерной культуре клеток МА-104, в обоих случаях после обработки вирусного инокулята перед заражением трипсином или панкреатином (10 мкг/мл, 30 мин) или добавлением их в среду (0,5–1,0 мкг/мл) после адсорбции вируса (K.W. Theil et al., 1977). Адаптированные штаммы вызывали округление и разрушение клеток или образование синцития. РВС можно обнаружить практически во всех репродукторных свинофермах (хозяйствах). 70–100% взрослых свиней имеют антитела к РВС серогрупп А, В и С, что фактически исключает возможность разведения их в практических условиях, свободных от РВС. Ротавирусы серогруппы А циркулируют у свиней всех возрастных групп (J.C. Bridger et al., 1985). Они обычно вызывают диарею у поросят после рождения или вскоре после отъема. Вирус распространяется фекально-оральным путем, и при возникновении заболевания инфекция может протекать энзоотически. Инфицирование сопровождается образованием циркулирующих и секреторных антител к гомологичному серотипу вируса, которые передаются потомству с молозивом и молоком. Лактогенный иммунитет длится 3–5 нед. (S. Tzipori et al., 1980a). Потомство основных свиноматок менее чувствительно к заражению РВС, чем таковое ремонтных свинок (B. Svensmark et al., 1989a). Поросята обычно инфицируются в возрасте 7–40 дней (E.H. Bohl et al., 1978). Поросята при острой стадии болезни выделяют с калом наибольшее количество вируса, а взрослые животные – иногда перед опоросом (D. A. Вenfield et al., 1982).
Инфицированная окружающая среда способствует возникновению болезни, так как РВС обладает выраженной устойчивостью, например, в кале свиней он может сохраняться 3 мес. (Z. E. Fu et al., 1987).
При экспериментальном заражении 1–5–дневных серонегативных поросят через несколько часов развивается профузная диарея, анорексия, что сопровождается обезвоживанием и истощением. 50–100% молодняка погибает на 2–5-й день после начала диареи.
В основе патогенеза при РВДС лежит нарушение пищеварения в результате разрушения вирусом дифференцированных эпителиальных клеток ворсинок тонкого отдела кишечника.
Вирусный антиген иногда обнаруживают в эпителиальных клетках слепой и ободочной кишки, а также в М-клетках пейеровых бляшек (K. W. Theil et al., 1978; C. R Buller et al., 1988; J. E. Collins et al., 1989). В результате гибели эпителиальных клеток ворсинки тонкого отдела кишечника укорачиваются на 2/3–1/10 нормальной длины. Патологоанатомические изменения ограничиваются тонким отделом кишечника. Лабораторная диагностика основывается на выявлении вирусного антигена методом ПЦР и ИФА в фекалиях или содержимом кишечника.
Ротавирусную инфекцию в свиноводческих хозяйствах трудно или вообще невозможно искоренить, в большинстве свиноводческих хозяйств она является персистентно-энзоотической инфекцией, возбудитель которой может длительно субклинически персистировать у взрослых свиней (D. A. Benfield et al., 1982). Увеличение концентрации вируса в окружающей среде может служить причиной заболевания молодых поросят, полученных от свиноматок первого опороса (J. C. Lecce et al., 1978). Инфицированность помещений ротавирусом снижают дезинфекцией их формалином или хлорсодержащими препаратами. Не следует смешивать поросят разного возраста и допускать контакта молодняка со старыми свиньями – наиболее вероятными носителями ротавируса.
Поросята, полученные от естественно инфицированных свиней, устойчивы к заражению гомологичным вирусом 3 недели после рождения, то есть в течение подсосного периода и наибольшей восприимчивости поросят к заболеванию. Пассивный (лактогенный) иммунитет обусловлен в основном секреторными IgA (sIgA) и в меньшей степени IgG и IgM. Первые присутствуют в молозиве и молоке свиноматок в значительно большей концентрации и устойчивы к протеолитической деградации в кишечнике поросят-сосунов. Циркулирующие сывороточные антитела не защищают против РВДС (R. A. Offit et al., 1985), тогда как клеточные факторы иммунитета, вероятно, вносят свой вклад в устойчивость к этой инфекции (R. A. Offit at al., 1988).
В свиноводческих хозяйствах практически все свиньи инфицируются в молодом возрасте. Естественный путь иммунизации ремонтных свинок – их инфицирование при непосредственном контакте со старыми свиноматками в начале первой супоросности, а затем в результате реинфицирования они приобретают выраженный лактогенный иммунитет. При пероральном инфицировании ротавирусом (так же, как вирусами ТГС и ЭДС) специфические антитела образуются клетками местной лимфоидной ткани в кишечнике, а у свиноматок, кроме того, и в молочной железе.
Способ вакцинации матерей влияет на класс синтезируемых иммуноглобулинов. Первичная оральная иммунизация ротавирусом (или другими энтеропатогенными вирусами) – наиболее эффективный способ индукции синтеза sIgA в молочной железе и кишечнике, а парентеральная эффективна для стимуляции синтеза sIgA только в том случае, если животные первоначально были иммунизированы орально или назально.
Основным направлением специфической профилактики новорожденных является бустеризация супоросных свиноматок. Для этого в некоторых странах производят живые и инактивированные вакцины, эффективность которых неоднозначна (M. Pensaert et al., 1997).
В конце прошлого века нами в ВИЭВе была создана живая вакцина против РВДС, которая не нашла практического применения из-за малой актуальности заболевания.
Учитывая, что ТГС и РВДС могут протекать совместно и особенно тяжело, а также принимая во внимание значение бустеризации при РВДС, мы разработали комбинированную вакцину ТР-1 против ТГС и РВДС, которую успешно применяют в борьбе с этими болезнями в промышленном свиноводстве.